简介:
胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇,是一种环戊烷多氢菲的衍生物,分子式C27H46O,分子量为3860.65。胆固醇广泛存在于动物体内,其中脑、神经组织最丰富,在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。
Leagene总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂微板法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等,血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇,2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯,后者被CEH水解为游离胆固醇,使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应,生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。酶标仪在500~520nm处进行比色测定。本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考):
1、 样本处理:
①血清、血浆、脑脊液样本:从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血,直接检测,如超过线性范围,用生理盐水稀释后检测。 ②细胞样本:
a、取适量的细胞(一般推荐>106以上),离心,弃上清,留取沉淀。 b、用PBS或生理盐水清洗1~2次,离心,弃上清,留取沉淀。
c、加入200~300μl的PBS或生理盐水匀浆,冰浴条件下超声破碎细胞,功率300W,每次3~5s,间隔30s,重复3~5次。亦可手动匀浆,制备好的匀浆液不可离心,待用。 d、③组织样本:准确称取适量组织样本,按质量(g):生理盐水或PBS(ml)=1:9的比例,加入生理盐水或PBS,冰浴条件下手动或机械匀浆。离心取上清待用。
2、 酶标仪TC测定操作:
①按下表依次加入试剂:
②充分混匀,水浴中孵育。
③酶标仪测定500~520nm吸光度。以空白管调零,读取标准管和各待测管的吸光度。
3、 分光光度计(1ml比色杯)、半自动生化分析仪TC测定操作:
①按下表依次加入试剂:
②充分混匀,孵育。
③分光光度计测定500~520nm吸光度。以空白管调零,读取标准管和各待测管的吸光度。
4、 普通分光光度计(2ml比色杯)TC测定操作:
①按下表依次加入试剂:
②充分混匀,水浴中孵育。
③分光光度计测定500~520nm吸光度。以空白管调零,读取标准管和各待测管的吸光度。
5、 全自动生化分析仪TC测定操作:
①按下表依次加入试剂:
②充分混匀,水浴中孵育。
③全自动生化分析仪测定500~520nm波长处吸光度。以空白管调零,读取标准管和各待测管的吸光度。
主波长/次波长 500/600nm 反应类型 终点法 反应方向
升反应(+)
计算公式:
血清、血浆等液体样本(空白调零):
TC(mmol/L)={(待测管吸光度-空白吸光度)/(标准管吸光度-空白吸光度)}×5mmol/L 血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪):
TC(mmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×5mmol/L 细胞、组织等样本(空白调零):
TC(mmol/L)={(待测管吸光度-空白吸光度)/(标准管吸光度-空白吸光度)}×5mmol/L÷待测样本浓度(mg/ml)
细胞、组织等样本(全自动生化分析仪):
TC(mmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×5mmol/L÷待测样本浓度(mg/ml)
参考区间:
健康成年人理想范围:<5.2mmol/L(<200mg/dl)
边缘升高:<5.23~5.69mmol/L(201~219mg/dl) 升高:≥5.72mmol/L(≥220mg/dl) 备注:TC标准(5mmol/L)=442.48mg/dl
性能指标:
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